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    觸酶試驗酶液制備的實驗步驟

    點擊次數:781 更新時間:2022-10-27
      觸酶試驗是關于觸酶的一個實驗做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶,但鏈球菌屬陰性,故常用此試驗來鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗,結核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。
     
      觸酶試驗酶液的制備:
     
      1.稱取葉片 0.25g ,加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min
     
      離心15min取部分上清液經適當稀釋后用于酶活性測定。
     
      2.CAT活性的測定
     
      在3ml的反應體系中,包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液
     
      啟動反應,測定波長240nm處的OD降低速度。將每分鐘OD減少0.01定義為1個活力單位。
     
      3.POD活性的測定
     
      在3ml的反應體系中,包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈創木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml,最后加入0.05ml酶液啟動反應,記錄470nm處OD增加速度。將每分鐘OD增加0.01定義為1個活力單位。
     
      4. 用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量。
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